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标题: 工艺表征试剂盒实验------如何选择Z优化的包被条件？ [打印本页]

作者: shilu 时间: 2022-10-16 20:36
标题: 工艺表征试剂盒实验------如何选择Z优化的包被条件？
　　一、包被抗原的选择
　　工艺表征包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类.天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化).ELISA试剂盒经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。
　　二、包被液的选择
　　一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
　　三、包被浓度的选择
　　包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的zui适包被浓度需要通过实验来确定。
　　四、包被温度的选择
　　通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持。

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