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标题: 细胞系开发流程样品的制备 [打印本页]

作者: shilu 时间: 2022-12-13 17:10
标题: 细胞系开发流程样品的制备
　　抗体药物生产公司开始纯化蛋白前应先制备初始样品。真正进行蛋白纯化的操作之前，首要考虑是目的蛋白的来源。样品来源可为原始样品，例如肝脏，肌肉或脑组织。虽然后基因组学领域的研究者很少使用原始组织纯化蛋白，但当研究者想要关联某一蛋白序列的催化活性时，会有这样的需求。
　　当前，更为常见的是从重组来源的样品纯化蛋白质。一些重要决定需要提前考虑以便优化后续的纯化。研究者需要考虑蛋白质的最终用途（例如酶测定，结构研究，抗体生成），因为这将决定最终蛋白质制备所需的量和纯度。尽管蛋白质表达的详细讨论超出本文范围，但是在这一点上仍有几个值得考虑的基本点，因为它们直接影响后续的蛋白纯化。
　　哪个系统的表达水平最高？一般规则是，表达水平越高，越容易获得大量高度纯化蛋白。
　　1.如果选择大肠杆菌表达系统，最终目的可溶性表达或不可溶表达是包涵体形式吗？由于包涵体中有高丰度的重组蛋白，包涵体的分离本身构成了纯化的重要步骤; 这必须与溶解难易和随后包涵体中再折叠靶蛋白的难易以及可溶性蛋白的最终产量相平衡。已经有许多工作优化了从包涵体中产生功能蛋白的产量。
　　2.另一个考虑是是否靶向胞内或胞外（分泌的）表达。胞内表达需要将蛋白质从大量宿主细胞蛋白中纯化而来。相比之下，特别是当宿主细胞在无血清条件下生长时，目标蛋白的有效分泌要求蛋白必须从少量分泌的宿主蛋白中纯化而来。
　　无论目标蛋白的来源如何，作为纯化的初始步骤，原始样品的制备很重要。同时也需要考虑表达和纯化策略。

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