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标题: 根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法 [打印本页]

作者: shilu 时间: 2022-12-24 23:34
标题: 根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法
　　抗体药物研发公司亲和层析法（aflinity chromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体（Ligand）的分子能特异而非共价地结合。
　　其基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离（Separation），提纯（Purification）和鉴定（Characterization）是生物化学中的重要的一部分，至今还没的单独或一****成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。
　　蛋白提取纯化注意事项
　　在进行任何一种蛋白质纯化的时候，都要时刻注意维护它的稳定性，保护它的活性，有一些通用的注意事项需要牢记，它们包括：
　　1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。
　　2、不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL——mg/mL。
　　3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。
　　4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。
　　5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。
　　6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。
　　7、在缓冲溶液中加入0.1——1mmol/LDTT（二硫苏糖醇）（或β-巯基乙醇），防止蛋白质的氧化。
　　8、加1——10mmol/LEDTA金属螯合剂，防止重金属对目标蛋白的破坏。
　　9、使用灭菌溶液，防止微生物生长。

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