抗体亲和力测定

zhangzey

　　抗体与抗原表位或抗原决定簇之间的结合力称为抗体亲和力，下载其本质是一种非共价作用力，包括对氨基酸之间的吸引力，氢键，疏水性作用力等。亲和力测定服务抗体亲和力体现了一个抗体分子和一个半抗原分子或抗原分子的一个决定簇起反应的能力。

　　抗体亲和力的大小可以用亲和力常数KD（单位为升/质量摩尔浓度）表示，其计算公式为

　　KD=[Ab▪H]/（[Ab][H]）

　　其中[ ]表示摩尔浓度，Ab表示抗体，H表示半抗原，Ab—H表示抗体与半抗原的结合物

　　亲和力常数KD越高，则抗体结合半抗原的能力越强。抗体亲和力的强弱取决于抗体对位（Paratope)与所用抗原表位（epitope)之间的配合程度，包括接触面积的大小、吻合的密切程度、以及带点基团与疏水基团的分布等。

　　根据生物膜干涉技术（BLI），可利用Fortebio Octet®检测仪器对抗体亲和力进行测定的原理为：生物传感器底端由固定的相互作用分子组成的生物膜层覆盖，当具有一定带宽的可见光垂直入射生物膜层时，光在生物膜层的两个界面反射后形成被光谱仪检测到的一定波长的干涉波。固定分子与溶液中分子发生相互作用时，生物层厚度增加，干涉光谱曲线向波长增加的方向移动，相位移动由工作站探测并分析，可定量得出传感器表面分子数量变化及相关浓度与动力学数据。

　　固相放射免疫法（SP-RIA）

　　固相放射免疫法可以比较准确的测出抗体亲和力常数，其操作步骤为：用抗原（如病毒颗粒或蛋白质）包被微板，加入系列稀释的定量单克隆抗体。温育至反应平衡后，洗去未结合的单克隆抗体加放射性同位素标记的抗小鼠lg第二抗体，温育后洗涤，将小孔割下计数结合的放射性强度。只要保持包被抗原量恒定，即可按公式（[Ab]a/[Ab]r-[Ab]B)/(Ab)a=-nK。其中[Ab]a为结合抗体浓度，[Ab]r为总抗体浓度，n为抗体结合价，K为亲和力常数。