药物申报CAR-T单克隆抗体分离纯化策略—亲和层析介质

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　　自从抗体被发现以来，有多种方法可以用于分离纯化抗体，药物申报CAR-T全球的科学家们一直在探索有效的单抗分离纯化方法，以及适于抗体药物规模生产的工艺。本文对已经报道过单抗的分离纯化方法做以总结，为规模化抗体药物分离纯化工艺的提供选择策略。
　　1  单克隆抗体的纯化工艺
　　单克隆抗体的分离纯化工艺采用三步法纯化策略：捕获--中度纯化--精纯。根据捕获所选用的层析介质不同主要分两种类型：
　　A. 使用经典的Protein A为捕获步骤设计的纯化工艺。
　　B. 使用非Protein A 设计的纯化工艺。
　　现在在已经上市的抗体（包括Fc融合蛋白）药物，两种工艺均有采用。但是以Protein A为捕获工艺的产品约占70%。使用非protein A捕获的工艺约30%。随着抗体项目不断增多，抗体纯化工艺的平台工艺随之出现。抗体有类似的结构，所以使用平台工艺可以更好的了解工艺特性，产品质量等特性。为GMP认证中的工艺验证提供基础。更快的将产品推向市场。
　　2. 单抗分离纯化中的亲和层析介
　　亲和层析具有专一、高效的特性，使用亲和层析纯化后，抗体的纯度一般大于95%以上，收率在95%以上；所以在抗体纯化工艺中一般使用亲和层析作为单抗纯化工艺的捕获步骤。在单抗分离纯化中，按照不同的产品特性可以选择的亲和层析主要有：
　　A.嵌合抗体，人源化，全抗体一般使用Protein A 或Protein G层析介质为捕获步骤；
　　B FC融蛋白一般使用Protein Ａ层析介质做捕获步骤。
　　C  Fab片段，或scFv 单链抗体一般使用ProteinL层析介质捕获， Protein L （Capto L）对轻链kappa片段有特异吸附。如果轻链的种类是Lambda，可以选择LambdaFabSelect层析介质特异的捕获。
　　D 单区域抗体sdAb一般有VH区域，也可以使用protein A，如MabSelect 作为捕获步骤。