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[生活小知识] 羊驼抗体生产公司选择亲和标签时需考虑的因素

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发表于 2022-12-22 23:29 | 只看该作者 回帖奖励 |正序浏览 |阅读模式
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  羊驼抗体生产公司亲和标签与目标蛋白之间的作用是相互的,需要综合的考虑,既要考虑到对目标蛋白结构功能的影响,又要考虑到对标签与其配体亲和作用的影响,以及实际的用途。

  (1)亲和标签是否会影响到目标蛋白的结构和功能,大多数情况首选短的多肽标签,这是因为短的肽标签对目标蛋白的结构影响最小,而大的亲和标签可能限制重组蛋白的折叠,影响蛋白质的生物学功能。

  (2)亲和标签对蛋白质稳定性的影响,亲和标签的加入是否会影响到目标蛋白的正确折叠,是促进目标蛋白的可溶性,还是容易形成包涵体,会不会造成氨基酸C和N端破坏,使目的蛋白表达不完全。

  (3)亲和标签所融合的位置,亲和标签可以加在N端,可以加在C端,也进行串联。多数情况下蛋白质的N端区域对蛋白质的功能不是太重要,所以在N端进行融合标签的融合常常能保留蛋白质的生物学功能。由于N端DNA序列对蛋白质的转录翻译影响较大,所以标签加在N端对蛋白质的表达水平影响更大,优化标签的mRNA结构可使表达水平提高。可能有些蛋白纯化后需要去除亲和标签C端融合在去除融合标签后在目标蛋白的C端会有几个氨基酸残留,而小心的选择剪切特异性的氨基酸序列就可以在去除N端亲和标签后得到天然的目标蛋白。

  (4)亲和洗脱的条件,有些条件比较温和,而有些条件较为剧烈,选择的亲和表达系统应该不使目标蛋白变性。



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